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恒遠生物|大鼠胚胎心肌細胞H9c2(2-1)培養攻略
品牌: 恒遠生物
貨號: HYCC30031
中文名稱: 大鼠胚胎心肌細胞
規格: T25
形態特性: 上皮樣細胞生長
生長特性: 貼壁生長
培養條件:DMEM+10%FBS
傳代方法: 1:2~1:6傳代；2~3天換液1次。
凍存條件: 無血清細胞凍存液
特征特性：該細胞由Kimes B和Brandt B從BD1X大鼠胚胎心臟組織的克隆細胞株亞克隆得到；表現出許多骨骼肌的特性。這個細胞株中的成肌細胞能融合形成多核的肌管，并對乙酰膽堿的刺激發生反應。如果培養基中的血清濃度下降到1%，融合很快發生。
一、細胞收到后處理
細胞在培養瓶中培養至良好狀態后灌滿完全培養液并封好瓶口是細胞運輸的常見辦法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作，培養箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養液收集至離心管中，加入6ml完全培養基，放入37℃、孵箱培養；超過80%匯合度時，根據情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養步驟。（注意發貨的是密封培養瓶的話，處理完后放入培養箱培養記得培養瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養基，另外一瓶用自己配的完全培養基），若是5%CO2的培養箱，可用密封培養瓶，擰緊瓶蓋后放入5%CO2培養箱，48H內要換液一次。
二、細胞培養步驟
1.培養皿/瓶用槍頭或移液管吸去原培養液。
2.無菌PBS或無菌生理鹽水洗滌3次（按培養體積加入）。
3.加入適量胰酶消化適當時間（一般胰酶為0.25%；9cm/10cm培養皿和25cm培養瓶，一次加入1mL胰酶。消化時間視細胞類型等多種情況綜合考慮，一般如果是細胞株，非原代培養，消化1－2分鐘足矣）。
4.用槍頭吹打數十次（視細胞類型而定。一般細胞株30－50次吧，耗時一般2分鐘左右）。
5. 加入適量體積完全培養基終止胰酶消化（如果是9cm/10cm培養皿和25cm培養瓶，可以加入1mL完全培養基；現在培養瓶（皿）里有2mL溶液）。
6.現在可以將溶液進行分瓶（2mL）。如果是細胞株，直接均分到兩個培養瓶（皿）里。如果是原代培養，可以根據消化時間來對細胞進行分離；因此可以將溶液（2mL）都轉入新的培養瓶（皿）。
7.將兩個培養瓶（皿）補足完全培養基到正常體積（果是9cm/10cm培養皿和25cm培養瓶，為5mL完全培養液）。
8.鏡下觀察。剛剛傳代細胞還沒貼壁，懸浮在溶液中，呈圓形。一般2h之內會貼壁，如果已經貼壁，根據細胞類型有不同的形態，但通常都不是圓形。
9.鏡下觀察無誤之后，再放入細胞培養箱。培養瓶（皿）放入之前，可以用消毒酒精先擦一下。
10.傳代之后，最好第二天細胞換液一次。當然，也可以視情況而定。
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